體外培養(yǎng)細(xì)胞貼壁與什么有關(guān)

首先并不是所有的細(xì)胞在體外培養(yǎng)的情況下都會(huì)貼壁，但大部分來(lái)自實(shí)體組織器官的細(xì)胞都會(huì)貼壁。

貼壁的過(guò)程可能是這樣的

細(xì)胞首先分泌細(xì)胞外基質(zhì)，這種細(xì)胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面（培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿的底面）。然后，細(xì)胞通過(guò)其表面表達(dá)的黏附因子與這些細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。

所以細(xì)胞貼壁與否和細(xì)胞本身分泌細(xì)胞外基質(zhì)的能力以及細(xì)胞本身表達(dá)的黏附分子的數(shù)量有關(guān)，也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。

細(xì)胞貼壁的過(guò)程使形態(tài)發(fā)生很大變化，細(xì)胞形態(tài)改變是細(xì)胞內(nèi)骨架（是真核細(xì)胞中的蛋白纖維網(wǎng)架體系，由微管、微絲及中間纖維組成的體系）本身和細(xì)胞外基質(zhì)共同作用的結(jié)果。

密度大于培養(yǎng)基的細(xì)胞（絕大部分細(xì)胞）會(huì)沉降在底面上，那么細(xì)胞要生存必定得改善這個(gè)環(huán)境，分泌細(xì)胞外基質(zhì)，改善底面的結(jié)構(gòu)，然后很自然就貼附在底面上了。

密度小于水的細(xì)胞，如脂肪細(xì)胞，漂浮在液面上，所以不可能貼在底面上，但是如果將培養(yǎng)液加滿，那么細(xì)胞能夠與培養(yǎng)瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。因此可以說(shuō)，細(xì)胞貼壁是適應(yīng)環(huán)境的一種反應(yīng)。

A: 細(xì)胞傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜損傷，使細(xì)胞貼壁不牢固，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡，漂浮細(xì)胞多等情況發(fā)生。

B : 缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無(wú)血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會(huì)下降很多。

C: 支原體、細(xì)菌、真菌的污染導(dǎo)致細(xì)胞背景臟等。

D: 培養(yǎng)液配置、儲(chǔ)存不當(dāng)，如培養(yǎng)基開(kāi)封過(guò)久，添加的因子析出、氨基酸分解等導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)不充足。

E: 復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。

F: 接種細(xì)胞數(shù)目太少，無(wú)法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。

G: 復(fù)蘇時(shí)處理速度太慢，容易形成冰晶刺破細(xì)胞膜。

???

最好用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細(xì)胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細(xì)胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。

1. 合適的消化液和優(yōu)良的培養(yǎng)基是細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的一個(gè)開(kāi)始，配置好合適的培養(yǎng)基是一個(gè)很關(guān)鍵的元素。

2. 使用合適的細(xì)胞外基質(zhì)或貼壁試劑。

3. 復(fù)蘇新的細(xì)胞，初期提高血清濃度幫助細(xì)胞復(fù)原。

4. 有的細(xì)胞傳代接種一定要鋪的均勻，使用畫8字的方法，避免細(xì)胞抱團(tuán)扎堆生長(zhǎng)。

5. 細(xì)胞傳代24小時(shí)之內(nèi)，最好不要晃動(dòng)和觀察細(xì)胞狀態(tài)，以免影響貼壁。

6. 體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長(zhǎng)。

對(duì)貼壁比較弱的細(xì)胞和原代培養(yǎng)時(shí)，經(jīng)常會(huì)對(duì)用到的培養(yǎng)瓶/皿進(jìn)行包被，那怎么包被讓產(chǎn)品發(fā)揮它的價(jià)值呢？

牛血漿纖維粘連蛋白：使用親和色譜法提純自牛血漿，是促進(jìn)細(xì)胞貼壁和延伸生長(zhǎng)的理想基質(zhì)。它可與細(xì)胞細(xì)胞膜表面受體和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合是促進(jìn)細(xì)胞貼壁和延伸生長(zhǎng)的理想基質(zhì)。推薦包被濃度為1-5ug/cm2是促進(jìn)細(xì)胞貼壁和延伸生長(zhǎng)的理想基質(zhì)。37℃孵育1小時(shí)或4度冰箱過(guò)夜即可。

多聚賴氨酸：是一種化合物，是帶正電荷的氨基酸，通過(guò)改變培養(yǎng)基基地表面的電極來(lái)促進(jìn)細(xì)胞貼壁。推薦使用2ug/cm2的濃度，37度孵育一個(gè)小時(shí)以上即可使用。

0.2％的明膠溶液：明膠是來(lái)自于膠原的高分子水溶蛋白混合物。推薦用于分化的人胚胎干細(xì)胞以及某些原代和永生化細(xì)胞類型的培養(yǎng)。

包被后養(yǎng)得更漂亮的細(xì)胞系：SHSY-5Y 、INS-1 、293 、Besa-2b 、GH3、原代復(fù)蘇等。

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