首先并不是所有的細胞在體外培養(yǎng)的情況下都會貼壁，但大部分來自實體組織器官的細胞都會貼壁。

細胞首先分泌細胞外基質(zhì)，這種細胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面（培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿的底面）。然后，細胞通過其表面表達的黏附因子與這些細胞外基質(zhì)結(jié)合。

所以細胞貼壁與否和細胞本身分泌細胞外基質(zhì)的能力以及細胞本身表達的黏附分子的數(shù)量有關(guān)，也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。

細胞貼壁的過程使形態(tài)發(fā)生很大變化，細胞形態(tài)改變是細胞內(nèi)骨架（是真核細胞中的蛋白纖維網(wǎng)架體系，由微管、微絲及中間纖維組成的體系）本身和細胞外基質(zhì)共同作用的結(jié)果。

密度大于培養(yǎng)基的細胞（絕大部分細胞）會沉降在底面上，那么細胞要生存必定得改善這個環(huán)境，分泌細胞外基質(zhì)，改善底面的結(jié)構(gòu)，然后很自然就貼附在底面上了。

密度小于水的細胞，如脂肪細胞，漂浮在液面上，所以不可能貼在底面上，但是如果將培養(yǎng)液加滿，那么細胞能夠與培養(yǎng)瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。因此可以說，細胞貼壁是適應環(huán)境的一種反應。

A: 細胞傳代最重要的是胰酶處理時間：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜損傷，使細胞貼壁不牢固，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡，漂浮細胞多等情況發(fā)生。

B : 缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細胞的貼壁效果會下降很多。

C: 支原體、細菌、真菌的污染導致細胞背景臟等。

D: 培養(yǎng)液配置、儲存不當，如培養(yǎng)基開封過久，添加的因子析出、氨基酸分解等導致營養(yǎng)不充足。

E: 復蘇的細胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。

F: 接種細胞數(shù)目太少，無法分泌足夠的細胞外基質(zhì)。

G: 復蘇時處理速度太慢，容易形成冰晶刺破細胞膜。

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最好用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對培養(yǎng)瓶進行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。

1. 合適的消化液和優(yōu)良的培養(yǎng)基是細胞貼壁生長的一個開始，配置好合適的培養(yǎng)基是一個很關(guān)鍵的元素。

   2. 使用合適的細胞外基質(zhì)或貼壁試劑。

3. 復蘇新的細胞，初期提高血清濃度幫助細胞復原。

4. 有的細胞傳代接種一定要鋪的均勻，使用畫8字的方法，避免細胞抱團扎堆生長。

5. 細胞傳代24小時之內(nèi)，最好不要晃動和觀察細胞狀態(tài)，以免影響貼壁。

6. 體內(nèi)上皮細胞生長在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長。

對貼壁比較弱的細胞和原代培養(yǎng)時，經(jīng)常會對用到的培養(yǎng)瓶/皿進行包被，那怎么包被讓產(chǎn)品發(fā)揮它的價值呢？

牛血漿纖維粘連蛋白：使用親和色譜法提純自牛血漿，是促進細胞貼壁和延伸生長的理想基質(zhì)。它可與細胞細胞膜表面受體和細胞外基質(zhì)結(jié)合是促進細胞貼壁和延伸生長的理想基質(zhì)。推薦包被濃度為1-5ug/cm2是促進細胞貼壁和延伸生長的理想基質(zhì)。37℃孵育1小時或4度冰箱過夜即可。

多聚賴氨酸：是一種化合物，是帶正電荷的氨基酸，通過改變培養(yǎng)基基地表面的電極來促進細胞貼壁。推薦使用2ug/cm2的濃度，37度孵育一個小時以上即可使用。

0.2％的明膠溶液：明膠是來自于膠原的高分子水溶蛋白混合物。推薦用于分化的人胚胎干細胞以及某些原代和永生化細胞類型的培養(yǎng)。

包被后養(yǎng)得更漂亮的細胞系：SHSY-5Y 、INS-1 、293 、Besa-2b 、GH3、原代復蘇等。

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