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賽普科普 | 為何新冠病毒核酸檢測可能出現(xiàn)假陽性?
2022-03-10



首先是實驗人員嚴(yán)格遵守新冠病毒核酸檢測的規(guī)章制度,是防止實驗室污染的重要前提。

其次是實驗室的結(jié)構(gòu)。實驗室的每個區(qū)域都需要一個相對獨立的結(jié)構(gòu),各區(qū)物品不混用,僅通過傳輸窗傳輸,并沿單一方向流動。特別是樣品處理區(qū)域應(yīng)確保與傳輸窗口以外的其他區(qū)域沒有通信。



最后,臨床取樣過程也非常重要。例如,新冠疫苗導(dǎo)致的假陽性在疫苗中的核酸片段被完全降解之前,如果留在人體表面或衣服上的核酸片段污染了樣本,則在高靈敏度PCR擴增后很可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果。


新冠弱陽性質(zhì)控品和陽性對照品本身就是陽性物質(zhì)。如果處理或儲存不當(dāng),它們很容易被污染并導(dǎo)致假陽性。實驗室應(yīng)注意將弱陽性質(zhì)控品和檢測試劑分開存放

試劑盒打開后,陽性對照品和陰性對照品也應(yīng)轉(zhuǎn)移到樣品處理區(qū),以便正確放置;打開蓋子前,應(yīng)立即取出陽性對照品和弱陽性質(zhì)控品,以避免打開蓋子時濺落或污染手套;采樣時,應(yīng)先添加樣品和陰性對照,再覆蓋其他行的PCR管蓋,然后添加陽性對照。

不得在安全柜內(nèi)添加陽性對照品和弱陽性質(zhì)控品;操作時手套的尺寸必須合適。寬松的手套更容易被污染。如果手套可能受到污染,應(yīng)及時將手套退回并丟棄,并更換新手套。經(jīng)常更換手套可以有效地減少各種污染。


目前,大多數(shù)實驗室都有大量的檢測工作,在樣品添加和提取過程中容易發(fā)生交叉污染。特別是,當(dāng)重點人群(如隔離人員)的樣本與普通健康篩查人群的樣本一起檢測時,更容易產(chǎn)生假陽性。在這方面,我們應(yīng)該注重人群樣本和一般健康篩查人群樣本的儲存和批量檢測。



在檢測過程中,我們應(yīng)該按照《醫(yī)療機構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊(試行第二版)》要求中隨機放置3個生理鹽水,以便在實驗過程中監(jiān)測污染情況。


如果PCR管蓋蓋不嚴(yán)或加熱變形,擴增產(chǎn)物會蒸發(fā)到PCR儀器和實驗室中,造成大量持續(xù)污染。尤其是弱陽性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控孔泄漏后,更容易污染實驗室,產(chǎn)生大量假陽性。在這方面,我們應(yīng)該選擇質(zhì)量檢驗合格的匹配PCR管和管蓋。



取樣后,確認(rèn)所有PCR管均已覆蓋且無松動,然后使用機器進(jìn)行擴增;擴增PCR管應(yīng)小心取出,迅速放入密封袋中,用于一般醫(yī)療廢物處理。嚴(yán)禁打開蓋子和高壓滅菌處理。對于容易出現(xiàn)假陽性的實驗室,應(yīng)進(jìn)行實驗室環(huán)境污染評估實驗。如果實驗室環(huán)境受到污染,應(yīng)暫停日常實驗室測試,并對環(huán)境進(jìn)行清潔、消毒和通風(fēng)。


如果試劑在制備過程中被陽性質(zhì)控品或陽性樣品污染,則整板測試為陽性。通過更換試劑并重新放大,可以確定擴增產(chǎn)物是否受到污染或試劑受到污染。作為預(yù)防措施,我們應(yīng)嚴(yán)格遵守實驗室的規(guī)章制度,如實驗室的單流程操作和實驗室工作服和物品的不混合;同時,還應(yīng)注意陽性質(zhì)控品和作者前面提到的陽性質(zhì)控品的儲存。


目前,由于每個實驗室的檢測量很大,在樣品混合、采樣和提取過程中不可避免地會產(chǎn)生氣溶膠。如果處理不當(dāng),可能會造成假陽性樣品的污染。此外,如果實驗室檢測試劑使用克隆質(zhì)粒作為陽性對照,很可能會造成污染,因為單位體積中克隆質(zhì)粒的含量相當(dāng)高,活細(xì)胞中的生長和繁殖更方便。作為預(yù)防措施,應(yīng)在每批實驗結(jié)束后進(jìn)行2小時的紫外線消毒。如果可能的話,可以使用尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG)同時清潔關(guān)鍵區(qū)域,以修飾和分解實驗室中殘留的核酸。

當(dāng)實驗結(jié)束后,我們?nèi)匀徊荒芊潘删瑁苏_發(fā)布報告外,為保障下一次實驗的順利進(jìn)行,避免假陽性,實驗室清潔及2小時的紫外消殺、定期使用核酸清除劑處理工作臺面、加樣槍、實驗室終末消毒等工作也必不可少。


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